熒光-PCR法技術(shù)已經(jīng)被廣泛應用于臨床疾病診斷各種傳染病診斷和療效評價(jià)；臨床疾病診斷動(dòng)物疾病檢測；食源微生物、食品過(guò)敏源、轉基因研究等食品安全操作等等各個(gè)領(lǐng)域。目前的實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)主要是基于熒光共振能量轉移（FRET)的原理，一對合適的熒光物質(zhì)可以構成一個(gè)能量供體(donor)和能量受體(acceptor)對，其中供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜重疊，當它們在空間上相互接近到一定距離(1-10 nm)時(shí)，激發(fā)供體而產(chǎn)生的熒光能量正好被附近的受體吸收，使得供體發(fā)射的熒光強度衰減，受體熒光分子的熒光強度增強。
熒光-PCR法試劑盒具有高特異性，與其他病毒無(wú)交叉反應，無(wú)非特異性擴增；檢測靈敏度可達10-100拷貝；操作簡(jiǎn)便，該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
熒光-PCR法的擴增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數增長(cháng)期和平臺期。在qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期，PCR反應過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著(zhù)反應循環(huán)數的增加，終PCR反應不再以指數形式生成模板，從而進(jìn)入平臺期，在該時(shí)期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，只有在熒光信號的指數增長(cháng)期，PCR產(chǎn)物量的對數值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。
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更新時(shí)間：2022-03-11
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